潔凈區(qū)潔凈等級劃分為：

：指高風險操作區(qū)，如：灌裝、放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域。通常用層流操作臺（罩）來維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。

B級：指無菌配制和灌裝等高風險操作區(qū)所處的背景區(qū)域。

C級和D級：指生產無菌藥品過程中重要程度較次的潔凈操作區(qū)。

此外還有一些諸如CNC， 百級、千級、之類的概念，這里不做展開討論。

目錄

一溫濕度

二靜壓差

三噪音

四照度

五沉降菌

六浮游菌

一、溫濕度

標準規(guī)定：潔凈區(qū)的溫度和相對濕度與藥品生產工藝要求相適應。無特殊要求時，潔凈區(qū)溫度為18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%。有特殊要求車間根據工藝控制。

溫度觀察：檢查溫濕度計是否完整，視線正對溫濕度計水平讀取顯示的數據，需要記錄的應立即填入表格中。

濕度觀察：視線正對濕度表，準確讀數。需記錄的應立即填入表格中。

需要加水的濕度計，在觀察前應檢查在蓄水腔內是否有水，無水則需加入適量水，再觀察濕度。

潔凈區(qū)的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。

設備計量人員每年至少組織校驗一次監(jiān)控系統的儀器設備。

二、靜壓差

標準規(guī)定：潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同等級潔凈區(qū)之間的壓差應不低于10帕斯卡，相同潔凈度等級不同功能的操作間之間應保持2-3帕的壓差梯度，以防止污染和交叉污染。

產塵房間與相鄰房間呈相對負壓。

潔凈區(qū)的靜壓差以微壓差計顯示，每日至少記錄兩次，上午一次，下午一次。（包括潔凈區(qū)與室外，不同潔凈級別間及所有有壓測試時所有的空調系統和層流系統應處于連續(xù)的正常運行狀態(tài)。

潔凈室所有的門應關閉，測試時不允許有人穿越房間。

當發(fā)現監(jiān)測結果超出標準規(guī)定的范圍時，應立即檢查原因，必要時對空調系統進行調整。

三、噪音

標準規(guī)定：潔凈區(qū)噪音不得高于70分貝。

潔凈區(qū)的噪音檢查每年不得少于一次，在經過設備大修、廠房改造、工藝布局調整等變更的時候應在變更結束后重新檢測噪音。

檢測方法:檢測點布置，當面積≤50m2時，僅測房間中心一個點；當房間面積較大時，每增加50m2增加一個點，測點距在1.2m。

四、照度

標準規(guī)定：潔凈區(qū)主要操作間照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均勻度不應小于0.7。

潔凈區(qū)的照度檢查每年不得少于一次，在經過設備大修、廠房改造、工藝布局調整等變更的時候應在變更結束后重新檢測照度。

檢測要求：室內照度測度必須在室溫已趨穩(wěn)定，光源光輸出趨于穩(wěn)定后進行（對熒光燈必須有100h）。

檢測方法:測點平面離地面0.85m，按間距1-2m布點，測點距墻面1m。其要求基本與潔凈度的測定位置要求相同。記錄實測照度值并計算總的平均照度。

照度測量一般僅測定除局部照明之外的一般照明。

五、沉降菌

5.1 方法概述

本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數來評定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。

5.2 使用的儀器和設備

高壓消毒鍋：使用時應嚴格按照操作規(guī)程進行。

恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。

培養(yǎng)皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min。

培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應在2～8℃的環(huán)境中存放。

5.3 測試步驟

采樣：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。

培養(yǎng):在30～35℃培養(yǎng)，時間為5天。每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。

5.4 測試狀態(tài)

沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內。

沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)已經過消毒。

測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

5.5 測試人員

測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于2個人。

5.6 測試時間

對單向流，如凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。

5.7 沉降菌采樣點

采樣點數目及其布置：最少采樣點數目：沉降菌的最少采樣點數可按表1確定。在滿足最少測點數的同時，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數，見表2。

表1最少采樣點數目

表2最少培養(yǎng)皿數

5.8 采樣點的布置

工作區(qū)測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。

5.9 結果計算

用計數方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數。

平均菌落數的計算見下式：

式中：m為平均菌落數；

m1為1號培養(yǎng)皿菌落數；

m2為2號培養(yǎng)皿菌落數；

mn為n號培養(yǎng)皿菌落數；

n為培養(yǎng)皿總數。

結果評定：用平均菌落數判斷潔凈室的空氣中的微生物。

潔凈區(qū)內的平均菌落數必須符合所選定的評定標準。見表3。

若某潔凈區(qū)的菌落數超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

重新測試仍不合格，按“潔凈室環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程"進行超標調查。

5.10 注意事項

測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

采取一切措施防止人為對樣本的污染。

對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數作詳細的記錄。

由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別。

采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現變質、破損或污染的應剔除。

六、浮游菌

6.1 取樣前準備工作

依據檢測區(qū)域的取樣點數，按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標準操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。

在超凈工作臺內，以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。

將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內于30～35℃培養(yǎng)48小時。取出逐個檢查，確認無菌落數后即可使用。

6.2 采樣

將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與QA人員取樣。

6.3 儀器、設備和培養(yǎng)基

浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（φ90mm×15mm）、培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）、恒溫培養(yǎng)箱

6.4 儀器、設備、培養(yǎng)基的要求

浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。應嚴格按儀器說明書的要求進行操作。采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性，檢驗項目有：定時器，轉盤轉速，流量計。每次測試前應先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調節(jié)流量計和定時器?？諝獠蓸恿扛鶕枰x定，已知采樣器的流量（L/min）,設定采樣時間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造，采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑，采樣管的長度應根據測定點的高度定，盡量減少彎曲。

6.5 測試方法

測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。采樣器進入被測房間前先用消毒劑滅菌。用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對采樣管的外壁、內壁進行消毒，應將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。

6.6 采樣程序

儀器經消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調好流量、轉盤轉速。關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣品縫隙高度。置采樣器于采樣點后，開啟采樣器、轉動定時器，根據采樣量設定采樣時間。

6.7 測試狀態(tài)

浮游菌測試前微生物限度檢查室已經消毒過。測試狀態(tài)為靜態(tài)測試，并在報告中注明測試狀態(tài)。

6.8 測試人員

測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。

6.9 測試時間

對單向流，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開始。對非單向流，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開始。

最少采樣點數目及其布置，最小采樣量，見下表:

工作區(qū)測點位置離地0.8m～1.5m左右，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。每個采樣點一般采樣一次。對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口1m以上。采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側。

6.10 培養(yǎng)

取樣結束后將平皿復倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內于30～35℃培養(yǎng)48小時。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。

菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時，仍以2個或2個以上的菌落計數。培養(yǎng)結束，將上述培養(yǎng)后的平皿取出，逐個點計菌落數，必要時用放大鏡檢查，并記錄。

6.11 結果計算

平均菌落數的計算見下式：

平均菌落數m=

式中：

m為該房間（或區(qū)域）的平均菌落數；

m1、m2‥‥‥mn為該房間（或區(qū)域）各取樣點的菌落數；

N為培養(yǎng)皿總數

記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數據。